三、尿白蛋白片段的檢測(cè)

（一）方法免疫印跡法。

（二）實(shí)驗(yàn)步驟

1、尿樣與樣品處理液等量混合，置沸水浴3分鐘。2、聚丙烯酰胺凝膠電泳，每孔加樣20μι，電壓200v。3、將膠上的蛋白帶轉(zhuǎn)印到硝基纖維素膜上，轉(zhuǎn)印電流340ma，2小時(shí)后取出，封閉1小時(shí)。4、加入白蛋白抗體和酶標(biāo)白蛋白，冰箱過(guò)夜。5、加入顯色液，出現(xiàn)蛋白帶為陽(yáng)性，未見(jiàn)蛋白帶為陰性。

（三）結(jié)論

通過(guò)實(shí)驗(yàn)得出凡是尿白蛋白陽(yáng)性者，尿白蛋白片段也為陽(yáng)性，而尿白蛋白陰性者中，仍有30%為尿白蛋白片段陽(yáng)性。曾有人對(duì)后者進(jìn)行隨訪(fǎng)觀察，發(fā)現(xiàn)他們中有18%發(fā)展為尿白蛋白，蛋白陽(yáng)性。因此，認(rèn)為尿白蛋白片段具有更高的特異性和早期栓出率，能更早地發(fā)現(xiàn)dn患者。

綜上所述，除尿微量白蛋白檢測(cè)是目前人們較為公認(rèn)的dn早期診斷指標(biāo)外，其它兩種都還在觀察及研究中。目前國(guó)內(nèi)外還沒(méi)有建立尿銅藍(lán)蛋白酶聯(lián)免疫測(cè)定方法，市場(chǎng)上買(mǎi)不到試劑盒，其作用機(jī)理還待于進(jìn)一步深入研究。免疫印跡法分析尿白蛋白片段，在我院已應(yīng)用于臨床，對(duì)尿白蛋白陰性者，再用本法檢測(cè)分析，可以更有效地避免早期糖尿病腎病的漏診，是預(yù)測(cè)腎臟病變的更為早期，更為靈敏的指標(biāo)。